三酰甘油氧化聚合甘油的檢測、評價及應用

三酰甘油氧化聚合甘油（Oxidized triacylglycerol polymers，TGP）是油脂氧化過程中發生的一類極其復雜的深度氧化產品，在油脂的加工、貯藏、運用過程中TGP總量持續遞加，經再次常規精粹也不衰減，是一個可以客觀表征油脂氧化程度的內源性目標。本文針對現在油脂氧化目標存在的缺點和高靈敏度TGP測定的規范技能缺失等問題，展開了TGP與油脂氧化關聯性及其在油脂質量點評中應用的相關研討，首要研討內容如下： 1、TGP的制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜檢測辦法研討。選用制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜（PFC-HPSEC）技能，研討樹立了一種適于檢測冷榨油和精粹食用植物油等低含量TGP（小于3%）油脂的檢測辦法，用中壓Flash柱預別離油脂極性組分，經高效體積排阻色譜細分TGO、TGD、ox-TG、DG、FFA等組分，用聚苯乙烯規范相對分子量定性，根據分量法測定油脂極性組分含量及高效體積排阻色譜面積歸一法定量油脂中TGO和氧化三酰甘油二聚物（TGD）百分含量，結果表明：TGO和TGD2別離在28-1800mg/L、11-2800mg/L范圍內線性關系杰出，相關系數（R）均高于0.99，TGO及TGD的最低檢測限別離為28mg/L、11mg/L，定量下限別離為113mg/L、44mg/L；相當于油脂中TGP的最低檢測限為0.01%(100μg/g)。制備型快速柱層析的3個極性組分加標水平的均勻回收率為95%-98%。制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜檢測油脂TGP的重復性RSD均小于10%。制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜辦法與經典的硅膠柱-高效體積排阻色譜辦法在定量油脂TGP的相對誤差低于8.9%。 2、TGP與油脂氧化程度關聯性研討。選用高效體積排阻色譜（HPSEC）技能，對食用植物油室溫貯藏氧化、Schaal烘箱法加速氧化、高溫煎炸氧化等三種油脂氧化過程中發生的極性組分（PCs）及其細分組分進行了比較剖析，一起監測了油脂氧化過程中內源性天然抗氧化劑VE的含量改變，樹立TGP與油脂氧化程度關聯性，結果表明：氧化三酰甘油（ox-TG）的量與誘導期出現杰出的線性關系。氧化三酰甘油寡聚物（TGO）的出現及內源性天然抗氧化劑VE的耗盡標志誘導期完畢的。TGO基本都是氧化三酰甘油的三聚體，估測首要是含環氧基、酮基、醛基、C-C鍵橋、C-O-C鍵橋的甘油酯。ln(TGO/TGO0)與大豆油氧化程度成線性關系。 3、TGP的凝膠浸透色譜色譜制備與穩定性研討。選用制備型快速柱層析聯用高壓凝膠浸透色譜技能，從油脂極性組分制備mg量級TGO和TGD，調查了TGP的二聚體和寡聚體在多種物理狀態與貯藏條件下的穩定性，用高效體積排阻色譜測定了極性組分各相關組分的分子量，結果表明：高壓凝膠浸透色譜制備TGP的優化條件為：選用三級串聯凝膠浸透色譜柱標準Waters UltrastyragelTMLinear四氫呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM500四氫呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM100四氫呋喃柱（19mm×300mm），上樣量500ul，活動相四氫呋喃，流速4.2mL/min，TGO、TGD的搜集時刻別離為29.00-32.10min、32.25-33.50min。以油脂極性組分為質料的高壓凝膠浸透色譜制備TGP周期約為1h，單次別離獲得0.49mgTGD與0.23mgTGO，純度均在99%以上，TGD與TGO得率別離為29%和13%。TGD與TGO的凝膠浸透色譜制品適宜在四氫呋喃溶液穩定貯藏，-20℃至20℃各溫度條件下60d******衰減均低于3%，TGP固體即使-20℃保存60d也衰減10%，在25℃室溫下運用不應超過6h。極性組分中TGO、TGD、ox-TG、DG的分子量（Mw）別離為2469、1728、908、510，TGO以三聚體為主。 4、TGP的細胞毒性點評。研討了不同TGP濃度對巨噬細胞Ana-1的作用，選用倒置相差鏡調查細胞生長，噻唑藍（MTT）法檢測細胞增殖才能，激光共聚集鏡觀測細胞凋亡，酶標定量胞外乳酸脫氫酶，流式細胞術檢測胞內活性氧（ROS），結果表明：50μg/mL濃度的TGP致細胞顯著損傷，該濃度下的巨噬細胞在倒置相差顯微鏡下存活率顯著下降、增殖才能遭到明顯抑制、吞噬中性紅的才能明顯下降、乳酸脫氫酶釋放量明顯上升，細胞前期凋亡顯著。活性氧過度發生是TGP致細胞損傷的首要原因之一。TGD與TGO細胞毒性差異不顯著，支撐Billek的油脂TGP低吸收率的定論，尚不能確定與惡性腫瘤相關性。 5、基于TGP的油脂質量點評應用。展開了基于TGP的地溝油檢測、冷榨油鑒別和煎炸油質量操控、毛油質量點評等應用研討。比較剖析食用植物油與地溝油兩大樣本庫的TGP，定論如下：12種常見食用植物油41個樣本TGP含量0.69±0.41，3類典型地溝油64個樣本TGP含量6.01±3.44，差異極其明顯，據此可以一定程度精確鑒別地溝油；冷榨油具低TGP特征可明顯差異于精粹油；煎炸油中TGP與PCs線性相關，TGP直接指示煎炸油質量；毛油的TGP反映其新鮮程度。TGP在油脂質量點評中的應用優勢，依賴于分類油脂的TGP基礎數據庫。